การแยกและการตรวจสอบกิจกรรมการทำงานของเอนไซม์จากเชื้อราเอนโดไฟท์ ที่แยกได้จากกล้วยไม้ป่า 8 ชนิด | The Isolation and Screening of Extracellular Enzymatic Activities of Endophytic Fungi Eight from Orchid Species

Abstract

        Endophytic fungi were isolated from 8 different species of epiphytic orchids, including Aerides falcata, Aerides odorata, Cymbidium finlaysonianum Lindl., Coelogyne trinervis Lindl., Dendrobium lindleyi, Dendrobium secundum, Flickingeria ritaeana and Staurochilus fasciatus. From the total of 105 isolates, the highest number of isolates (52) were obtained from leaf segments followed by stems (33) and roots (20). All of the endophytic isolates from orchids were assessed for their ability to produce extracellular enzymes, including amylase, lipase, cellulase, pectinase and protease. According to enzymatic tests, 68% of the isolates exhibited pectinase activities followed by the activities of, 62% for lipase, 60% for cellulase, 46% for protease and 17% for amylase. The results verified that the endophyte isolate CfS 02, isolated from the stem of Cymbidium finlaysonianum Lindl. has high potential to produce all of enzymes tested, particularly the highest production of the cellulase enzyme with the extracellular enzyme production ratios (EPR) of 2.89. CfS 02 was identified as Xylaria sp. using morphological characteristics combined with molecular analysis.

บทคัดย่อ

        เชื้อราเอนโดไฟท์ที่แยกได้จากกล้วยไม้ป่าจำนวน 8 ชนิด ได้แก่ เอื้องกุหลาบกระเป๋าเปิด (Aerides falcata) เอื้องกุหลาบกระเป๋าปิด (Aerides odorata) กะเรกะร่อนปากเป็ด (Cymbidium finlaysonianum Lindl.) เอื้องใบหมาก (Coelogyne trinervis Lindl.) เอื้องผึ้ง (Dendrobium lindleyi) เอื้องแปรงสีฟัน (Dendrobium secundum) เอื้องขาไก่ (Flickingeria ritaeana) และเอื้องเสือโคร่ง (Staurochilus fasciatus)  มีทั้งหมด 105 ไอโซเลต โดยแยกได้จากส่วนใบ 52 ไอโซเลต ส่วนลำต้น 33 ไอโซเลต และส่วนราก 20 ไอโซเลต  ในการทดสอบกิจกรรมการทำงานของเอนไซม์ทั้งหมด 5 เอนไซม์ คือ เอนไซม์อะไมเลส เอนไซม์ไลเปส เอนไซม์เซลลูเลส เอนไซม์เพคติเนส และเอนไซม์โปรติเอส พบว่าราเอนโดไฟท์ส่วนใหญ่สามารถสร้างเอนไซม์เพคติเนสได้มากสุดคิดเป็นร้อยละ 68 รองลงมาคือ เอนไซม์ไลเปสคิดเป็นร้อยละ 62 เอนไซม์เซลลูเลสคิดเป็นร้อยละ 60 เอนไซม์โปรติเอสคิดเป็นร้อยละ 46 และเอนไซม์อะไมเลสคิดเป็นร้อยละ 17 ของเชื้อราเอนโดไฟท์ที่แยกได้ ราเอนโดไฟท์รหัส CfS 02 ที่แยกได้จากส่วนลำต้นของกล้วยไม้กะเรกะร่อนปากเป็ด พบว่ามีกิจกรรมการทำงานของเอนไซม์ทุกชนิดที่ทดสอบสูง โดยเฉพาะเอนไซม์เซลลูเลส มีค่า Extracellular enzyme production ratios (EPR) เท่ากับ 2.89 เมื่อนำมาจัดจำแนกด้วยลักษณะทางสัณฐานวิทยาร่วมกับการจำแนกทางพันธุกรรม พบว่าเป็นราเอนโดไฟท์ในกลุ่ม Xylaria sp.